换一批转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应
CONSTRUCTION OF TRANSCRIPTION FACTOR E2F-1 siRNA EXPRESSION VECTOR AND SILENCING POTENCY
摘要目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响.方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接人经BamH I和Hind Ⅲ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo表达质粒,并做酶切及测序鉴定.用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-I mRNA及蛋白表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-l siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86.4%、86.1%和81,5%、79.6%.结论:pSilencer4.1一E2F-l重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础.
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分类号
R735.2（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-930X.2008.02.004
发布时间
2008-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广西自然科学基金（0640085）
广西医疗卫生重点科研课题（200625）
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