换一批TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及其表达的研究
Construction and expression of lentiviral vector of TREM2 gene over-expression
摘要目的:构建小鼠编码2型髓样细胞触发受体(TREM2)基因过表达慢病毒载体,并且对其体外表达目的基因的水平进行检测.方法:采用PCR扩增TREM2基因片段,将扩增产物连接至经AgeI酶切后的线性化GV358载体;经PCR方法鉴定及DNA测序比对分析后,将其和包装质粒共转染至293T细胞并用药筛法行滴度测定.然后用重组慢病毒感染293T细胞,观察GFP表达并用实时定量PCR检测TREM2的表达水平.结果:通过PCR成功获得TREM2基因片段并连接到GV358病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定均证实TREM2-GV358携带有正确的TREM2基因;在293T细胞中包装获得病毒并用药筛法测定病毒滴度为2.0×108 TU/mL.感染293T细胞后可观察到大量明显的荧光细胞;实时定量PCR检测结果显示,TREM2过表达慢病毒感染293T细胞后TREM2的表达水平明显增加(P＜0.05).结论:成功构建TREM2-GV358慢病毒载体,为TREM2基因的后期研究提供了实验基础.
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栏目名称
DOI
10.16190/j.cnki.45-1211/r.2018.04.004
发布时间
2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.81460183）
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