摘要目的:通过网络毒理学预测结合多维度实验,筛选并验证眼镜蛇细胞毒素(CTX-1)的关键互作蛋白,并构建小鼠皮肤坏死模型,结合组织病理学与免疫组化分析,初步探讨CTX-1同所筛蛋白作用后与皮肤坏死的关系.方法:首先通过Super-PRED数据库预测CTX-1的互作蛋白,采用韦恩图筛选互作蛋白与GeneCards数据库中的皮肤坏死相关蛋白的交集蛋白;应用STRING数据库进行蛋白互作网络分析;利用Cytoscape v3.10.0软件挖掘关键互作蛋白并选取一个进行实验验证;通过分子对接分析CTX-1与所选关键蛋白分子相互作用位点,并采用双分子荧光互补(BiFC)、表面等离子共振(SPR)实验对两者的相互作用进行体内外实验验证;将小鼠随机分为正常对照组和3个实验组(每组8只,雌雄各半),构建40 μg、70 μg、100 μg浓度梯度的小鼠皮肤坏死模型,取小鼠皮肤组织进行组织病理学与免疫组化研究,统计分析各组小鼠皮肤组织中信号转导和转录激活因子3(STAT3)表达.结果:韦恩图结果表明CTX-1的潜在互作蛋白有48个,其中37个蛋白构成互作网络.从这些蛋白中挖掘到11个关键互作蛋白,并选取STAT3进行验证.分子对接结果显示STAT3与CTX-1的9个氨基酸形成11个氢键,构成二者的非共价作用.细胞内的BiFC实验初步证明了CTX-1与STAT3具有相互作用,体外的SPR实验得出CTX-1和STAT3的亲和力(KD)为4.327×10-8 M,证明两者具有较强的相互作用.HE染色病理切片可见中、高浓度CTX-1组小鼠皮肤组织有明显的坏死与炎性细胞浸润.免疫组化染色结果表明3个实验组STAT3阳性面积比率均高于正常对照组,且中、高浓度组与正常对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:眼镜蛇咬伤后,毒液中的CTX-1进入机体后可能与STAT3相结合,进而引发一系列的生理生化反应,从而导致局部组织的肿胀和坏死.