换一批
换一批摘要目的：对大鼠抑癌基因Mob1 a进行基因扩增，体外表达载体构建并且体外表达，为了进一步研究大鼠癌症发生分子机制提供支持。方法采用RNA提取技术获得总RNA后，进行体外反转得到cDNA。利用依据大鼠Mob1a基因序列设计合成的一对特异性引物，以大鼠cDNA为模板，RT－PCR扩增得到了预期大小的DNA片段。利用NheⅠ和HindⅢ限制性酶切位点将该目的DNA片段与pCDNA3．1－HA载体酶切后进行连接。转染HEK293 T细胞系，获得总蛋白后通过Western Blot分析检测该基因在体外是否成功表达。结果通过RT－PCR方法扩增了Mob1a基因，并且将该基因克隆至pCDNA3．1－HA。 Western Blot分析显示Mob1a－HA融合蛋白在体外表达。结论成功克隆了Mob1 a基因并且成功在体外表达该蛋白。
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