换一批绿色荧光蛋白-荧光素酶标记的人源化非小细胞肺癌原位动物模型建立方法
Establishment method of in situ animal model of humanized non-small cell lung cancer labeled by green fluorescence protein-luciferase
摘要目的 采用绿色荧光蛋白-荧光素酶(GL)标记的人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞建立人源化NSCLC原位动物模型.方法 制备GL逆转录病毒液.将上述病毒液转染至处于对数生长期的人类NSCLC细胞株(H460 细胞)后进行流式分选,从而构建稳定的GL阳性H460 细胞(H460-GL细胞).将15 只Nod-Scid小鼠随机分为低剂量组(n =5)、中剂量组(n =5)、高剂量组(n =5),分别以H460-GL细胞1.0×104 个/20 μL、1.0×106 个/20 μL、1.0×108 个/20 μL的密度进行小鼠肺组织原位注射.实验期间观察各组小鼠的一般情况及存活情况.每周通过荧光活体成像观察各组小鼠体内肿瘤的成活、生长情况.造模后第 35 天处死成瘤小鼠,取肺组织进行病理组织学观察.结果 (1)大部分小鼠出现呼吸系统肿瘤相关症状;濒死期小鼠胸腔内均出现不规则形状的白色肿瘤组织,且其与周围肺组织及心脏粘连严重.(2)造模后第22 天开始各组小鼠逐渐死亡,于造模后第35 天低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠的存活率分别为80%(4/5)、20%(1/5)、0.(3)在低剂量组中,于造模后第14 天仅有1 只小鼠出现H460-GL细胞荧光,造模第28 天的成瘤率为60%(3/5),且成瘤小鼠体内的荧光强度大小不一;在中剂量组、高剂量组中,所有小鼠在造模后第7 天均出现H460-GL细胞荧光,且荧光均逐渐增强,在造模后第14 天、第21 天成瘤小鼠体内的荧光强度相似且较为均匀.结论 该造模方法可获得稳定的人源化NSCLC原位动物模型,且操作简便、易于复制,可在动物体内模拟人类NSCLC发生、发展、转移过程,并能实时观察肿瘤大小与转移路径.
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关键词
非小细胞肺癌原位动物模型人源化绿色荧光蛋白-荧光素酶逆转录病毒荧光活体成像Non-small cell lung cancerIn situ animal modelHumanizationGreen fluorescence protein-luciferaseRetrovirusFluorescence in vivo imaging
分类号
R734.2（呼吸系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.11675/j.issn.0253-4304.2023.18.11
发布时间
2023-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京市科技计划课题（Z161100000216136）
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