重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞

Human umbilical vein Endothelial Cells by Recombinant Human Tissue Kallikrein Gene Transfer

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摘要目的探讨重组人组织型激肽释放酶(HK)基因腺相关病毒载体(rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作用.方法将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中,形成重组腺相关病毒(rAAV-HK)质粒,经聚合酶链反应(PCR)检测和DNA测序后,将rAAV-HK、pAAV-Helper和pAAV-RC 3种质粒通过脂质体共转染293细胞,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK,采用β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT1080中的表达,间接计算病毒滴度,并观察转染基因在传代细胞中的表达.在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组)和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组)48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测两组HUVECs HK mRAN的表达,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 rAVV/HK病毒滴度为6.2×107个/mL,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT1080细胞内稳定持续表达.与对照组比,HK转染组HUVECs HK mRNA表达增加(P<0.001);而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高,P值分别<0.01和<0.05.结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HUVECs,使其HK mRNA表达增加,NOS活性和NO含量升高,此结果为基因治疗人类血管内皮细胞异常提供客观依据.