换一批
换一批多用途树种无患子 ISSR-PCR 体系建立与检测
Detection and establishment of ISSR-PCR system for multipurpose tree species Sapindus mukorossi
摘要无患子(Sapindus mukorossi )是我国长江以南地区传统的重要绿化树种,其果皮富含皂苷,种仁富含油脂,为新型木本油料树种之一。为了获得基于 KOD FX 高保真 DNA 聚合酶试剂盒的无患子 ISSR-PCR 的最佳反应体系,该文采用正交优化设计相结合的方法,研究了引物浓度、dNTPs 浓度、KOD FX 酶、模板 DNA浓度和 Mg2＋浓度对无患子 ISSR-PCR 反应体系的影响,并在此基础上对退火温度进一步优化,最终确立了适合无患子的 ISSR-PCR 反应的最佳体系和程序,即20μL PCR 反应体系中,引物0．5μmol.L-1、dNTPs 0．05 mmol.L-1、KOD FX 酶0．06 U.μL-1、模板 DNA 浓度1．0 ng.μL-1和 Mg2＋1．0 mmol.L-1。当以 UBC841为引物时,PCR 扩增程序为94℃预变性2 min,98℃变性10 s,48．6℃退火30 s,68℃延伸90 s,35个循环,68℃延伸7 min,4℃保存。这一优化的 ISSR-PCR 反应体系的建立,为无患子种质资源的遗传多样性、亲缘关系及遗传结构研究、种质创新与分子辅助育种等奠定了良好的基础。
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栏目名称
研究论文
DOI
10.11931/guihaia.gxzw201405042
发布时间
2015-12-17
基金项目
国家林业公益性科研专项
浙江省重大科技专项重点农业项目(2011C12015)。
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