丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

Callus inducing on different phytohormone media and Agrobacterium￣mediated genetic transformation system optimizing of Salvia miltiorrhiza

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摘要为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog( MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件；采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明：(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS＋0.5 mg?L￣16￣BA＋0.5 mg?L￣12,4￣D；诱导茎较快产生愈伤的是MS＋0.1mg?L￣1 NAA＋0.5 mg?L￣16￣BA；1 mg?L￣1反式玉米素( ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织；1.0 mg?L￣12,4￣D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg?L￣1筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60％；而用10 mg?L￣1链霉素筛选阳性率达70％。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg?L￣1链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。