克雷伯氏菌gdrA和gdrB基因的克隆、协同表达与功能鉴定

Molecular cloning, co-expression and characterization of gdrA and gdrB genes encoding glycerol dehydratase reactivating factor of Klebsiella pneumoniae

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摘要1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,其生物法生产的研究越来越受到广泛的关注.以克雷伯氏菌的总DNA为模板,通过PCR分别扩增出约1.8 kb的 gdrA 和 0.4 kb的 gdrB 的两个基因片段,随后,将此两基因以多顺反子的方式与 pSE380 相连构建表达载体,并在大肠杆菌中进行了高效表达,表达量约占总蛋白的30%.将高效表达的激活因子用金属亲合层析和分子筛进行了纯化,得到电泳纯级的激活因子,SDS-PAGE分析显示:大、小亚基分子量约为64 kDa和12 kDa;非变性胶分析显示:全酶的分子量约为150 kDa,扫描分析激活因子是以α2β2方式结合的.以克雷伯氏菌甘油脱水酶为研究对象,进行激活实验,结果证实该激活因子具备甘油脱水酶激活因子的功能.该研究为进一步阐明甘油脱水酶的激活机制及1,3-丙二醇的高效生产奠定了基础.

作者齐向辉 ^[1] 韦宇拓 ^[2] 徐虹 ^[3] 黄日波 ^[4] 学术成果认领

作者单位江苏大学食品与生物工程学院,镇江,212013;广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,南宁,530005;南京工业大学食品与轻工学院,南京,210009 ^[1] 广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,南宁,530005 ^[2] 南京工业大学食品与轻工学院,南京,210009 ^[3] 广西科学院,南宁,530005 ^[4]

关键词甘油脱水酶激活因子协同表达结构

主题词甘油(Glycerol)脱水(Dehydration)基因(Genes)丙二醇(Propylene Glycol)研究(Research)

栏目名称

研究报告

DOI 10.3969/j.issn.1001-6678.2009.05.002

发布时间 2009-12-18

基金项目

国家"863"项目（2006AA020103,2006AA03Z0453）；江苏大学高级专业人才科研资助项目（08JDG009）；江苏省博士后科研资助项目（0901012B）