换一批
换一批GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化
Prokaryotic expression and purification of GST-His-Heparinase Ⅰ double labelled fusion protein
摘要以pET15b-Hep Ⅰ为模板,通过PCR技术扩增出上游含有6×His标签的Hep Ⅰ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1.测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-Hep Ⅰ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达.表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-Hep Ⅰ融合蛋白预期分子量相符;最终His-Hep Ⅰ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99％,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-Hep Ⅰ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度.本研究为制备高纯度的Hep Ⅰ提供了一种方法,对制备高安全性的LMWH和解析Hep Ⅰ晶体结构具有重要意义.
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栏目名称
研究与应用
DOI
10.3969/j.issn.1001-6678.2014.05.010
发布时间
2014-12-15
基金项目
教育部新世纪优秀人才支持计划
教育部博士点基金
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