换一批嗜热古菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的序列分析、基因克隆与异源表达
Cloning, sequence analysis and expression of S-adenosyl-methionine synthetase gene from Methanopyrus sp.SNP6
摘要将Methanopyrus sp.SNP6进行功能基因组测序,获得S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(sam)序列,并进行序列分析.将sam基因扩增后连接至表达质粒pET-28b(+),转化E.coli BL21(DE3),获得重组菌后进行诱导表达.生物信息学分析表明,sam基因编码蛋白的理论分子量为44 086.4 Da,三级结构为同源四聚体,与其他相关古菌来源的S-腺苷甲硫氨酸合成酶的蛋白序列较保守.实验结果显示,构建的重组表达质粒pET28b(+)-sam可在E.coli BL21(DE3)宿主菌中高水平表达.重组蛋白的分子量与预期值基本一致,部分为胞内可溶性表达,另一部分以包涵体形式存在.本研究首次实现了Methanopyrus sp.SNP6菌株S-腺苷甲硫氨酸合成酶的异源表达,为后期的蛋白纯化、酶学性质研究和酶促转化法生产S-腺苷甲硫氨酸奠定了理论基础.
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关键词
嗜热古菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶异源表达序列分析thermophilic archaeaS-adenosylmethionine synthetasesequence analysisprokaryotic expression
医学主题词
腺苷(Adenosine)5-甲基四氢叶酸-高半胱氨酸S-甲基转移酶(5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase)序列分析(Sequence Analysis)热温度(Hot Temperature)基因(Genes)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-6678.2017.04.004
发布时间
2017-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家海洋经济创新发展区域示范项目（12PYY001SF08）
浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)（2015R403095）
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