换一批
换一批CRISPR/dCas9在苜蓿中华根瘤菌中的建立与应用
Establishment and application of CRISPR/dCas9 in Sinorhizobium meliloti 320
摘要本文探讨了CRISPR/dCas9系统对苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320内源hemn基因的弱化效果,以提高其维生素B12的能力.实验首先验证了CRISPR/dCas9系统及CRISPR/dCas9系统不同N20靶向位点在S.meliloti 320中对外源基因gfp的弱化效果.结果 显示,当添加诱导剂1％木糖时,单位OD荧光值降低为对照菌株的34.18％,当N20靶位靠近翻译起始位点时,对结构基因弱化效果明显.进一步探究CRISPR/dCas9对S.meliloti 320中内源的弱化效果发现,在加入终浓度为1％木糖诱导后,hemE基因的转录水平与对照相比下降了28.3％.将henE基因弱化后的工程菌进行摇瓶发酵,其维生素B12产量较对照株提高了9.86％.研究结果显示,hemE基因的弱化有效促进了代谢流引向维生素B12合成,CRISPR/dCas9系统对S.meliloti 320内源结构基因具有较好的弱化效果.
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栏目名称
研究与应用
DOI
10.3969/j.issn.1001-6678.2019.06.005
发布时间
2020-01-17
基金项目
天津市杰出青年科学基金
国家自然科学基金
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