换一批毛丝鼠IRF4基因重组表达载体pET-28a(+)的构建及鉴定
Construction and Identification of Recombinant Expression Vector pET-28a(+)for Chinchilla IRF4 Gene
摘要干扰素调节因子 4(IRF4)作为免疫调节的重要转录因子,与多种肿瘤的发生发展密切相关.文章旨在克隆毛丝鼠IRF4基因,并构建其原核表达载体pET-28a(+),为深入研究IRF4 蛋白的生物学功能提供基础工具.首先,通过PCR技术扩增毛丝鼠IRF4基因片段,并利用同源重组方法将其插入经限制性内切酶线性化的pET-28a(+)载体.其次,将产物转化至大肠杆菌TOP10细胞,通过菌落PCR和基因测序鉴定阳性克隆,并将其转化至BL21(DE3)表达细胞,验证重组质粒的稳定性.结果显示,构建的IRF4-pET-28a(+)重组质粒经电泳鉴定片段大小约为 1 600 bp,与理论预测一致;插入的IRF4基因序列无误,且能在BL21(DE3)细胞中稳定存在.研究结果为进一步开展IRF4蛋白表达纯化及探索其在肿瘤发生中的作用机制奠定了实验基础.
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关键词
干扰素调节因子4pET-28a(+)PCR扩增同源重组BL21(DE3)interferon regulatory factor 4pET-28a(+)PCR amplificationhomologous recombinationBL21(DE3)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-6678.2025.05.048
发布时间
2025-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划项目（20240602099RC）
吉林省教育厅科学研究项目（JJKH20230291KJ）
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