换一批用锅柄聚合酶链反应法克隆卡地腐霉Pr1基因的未知片段
Cloning of Unknown Partner Sequence of the Subtilisin-like Protease Gene of Pythium carolinianum with Panhandle PCR Technique
摘要目的:分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知片段的3′端未知序列.方法:采用PANHANDLE PCR,以基因组DNA为模板,通过链内退火及延伸形成一个类似锅柄形状的结构,经嵌套式PCR扩增得到未知目的片段.通过已知cDNA片段设计引物,PCR扩增得到该蛋白酶部分基因组序列,采用限制性内切酶BamHⅠ消化卡地腐霉基因组DNA,经去磷酸化处理后,在消化片段3′端连接一段与卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因5′端已知序列互补的5′端磷酸化寡核苷酸链NA,经链内退火及聚合酶延伸形成一锅柄状结构.结果:获得一大小为876 bp的PCR产物,经序列分析验证,该panhandle PCR产物包含了已知卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因3′端未知的853 bp核苷酸序列.结论:这种特殊的PCR方法可以高度有效地克隆和鉴定已知片段两侧的未知基因片段.
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关键词
聚合酶链反应克隆,分子灭蚊害虫防治,生物学枯草杆菌蛋白酶碱基序列枯草菌素类蛋白酶卡地腐霉polymerase chain reactioncloning,molecularmosquito controlpest control,biologicalsubtilisinbase sequencesubtilisin-like proteasePythium carolinianum
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-2707.2005.01.002
发布时间
2005-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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