换一批摘要目的:探讨双荧光mRFP-eGFP-LC3(ptfLC3)体系在细胞自噬中的作用.方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-eGFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200nmol/L)处理3h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化.结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-Ⅱ蛋白和LC3-ⅡL/LC3-Ⅰ比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-eGFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加.结论:双荧光mRFP-eGFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法.
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关键词
雷帕霉素自噬人胚肾细胞LC3单荧光GFP-LC3质粒双荧光mRFP-eGFP-LC3rapamycinautophagyhuman embryonic kidney cellsLC3mono-fluorescence GFP-LC3 plasmiddual-fluorescence mRFP-eGFP-LC3
栏目名称
发布时间
2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81300151）
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