换一批
换一批FuGENE(R) 6 Transfection Reagent及 pEGFP-N1-HSF1转染JEG-3细胞条件的优化
Optimization of Condition for Transfection of JEG-3 Cells with FuGENE(R) 6 Transfection Reagent
摘要目的:优化FuGENE(R)6 Transfection Reagent (FuGENE)转染质粒pEGFP-N1-HSF1到人绒毛膜癌细胞JEG-3的条件.方法:利用DNA延滞实验考察pEGFP-N1-HSF1质粒与FuGENE试剂的结合力,用不同剂量的FuGENE试剂和质粒转染JEG-3细胞,通过倒置荧光显微镜和血球计数法计算其转染效率,筛选出最佳的转染条件并进行转染,通过qRT-PCR检测HSF1 mRNA的水平.结果:DNA延滞实验显示FuGENE和pEGFP-N1-HSF1质粒具有较高的结合力,当质粒量一定时,随着FuGENE量的增加,其转染效率先增加后降低;当FuGENE和质粒比例为2∶1(μL∶μg)时,转染效率最高,达(39.05±1.19)％;当固定转染比例时,随着转染剂量的增加,其转染效率先增加后降低,当转染剂量为250 μL时,转染效率最高,达(42.98±2.56)％;qRT-PCR结果显示,转染组HSF1 mRNA的水平较对照组有显著上调.结论:在转染比例为2∶1,转染剂量为250 μL时,对JEG-3细胞有最佳的转染效率.
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关键词
热休克转录因子氧化应激绿色荧光蛋白人绒毛膜癌细胞转染DNA延滞实验质粒FuGENEheat shock transcription factoroxidative stressgreen fluorescent proteinhuman choriocarcinoma cellstransfectionDNA arrearage assayplasmidFuGENE
栏目名称
DOI
10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.12.005
发布时间
2018-04-28
基金项目
国家自然科学基金（81401216,81760699）；
贵州省科学基金（黔科合J字(2014)2018号）；
贵阳市科技计划(联合基金)项目（(20161001)03）；
贵州省科学技术厅人才团队项目（黔科合平台人才(2016)5613\5677）；
贵州省教育厅项目（黔教合协同创新字(2013)04）
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