摘要目的 探讨微小RNA(miR)-299-5p靶向特异性蛋白 1(SP1)对帕金森(PD)模型细胞凋亡的作用和机制.方法 46 只雄性 C57BL/6 小鼠随机分为对照组(n =6)和PD组(n =40),PD组小鼠采用 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(MPTP)构建 PD模型;实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测不同时间小鼠脑组织中miR-299-5p和SP1 mRNA的表达;另取42 只雄性 C57BL/6 小鼠随机均分为对照组、PD组、PD+Ad-NC(阴性对照载体)组、PD+SP1 过表达腺病毒载体(Ad-SP1)组、PD+miR-299-5p过表达腺病毒载体(Ad-miR-299-5p)组、PD+Ad-miR-299-5p+Ad-NC组、PD+Ad-miR-299-5p+Ad-SP1 组,除对照组外、其余各组小鼠均制作PD模型,各组小鼠取中脑组织切片、并相应处理;取SH-SY5 Y细胞分为空白组、1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)组、MPP++miR-299-5p模拟物阴性对照(mimic-NC)组、MPP++miR-299-5p模拟物(miR-299-5p mimic)组、MPP++SP1 表达质粒(pc-SP1)的阴性对照质粒(pc-NC)组、MPP++pc-SP1 组、MPP++miR-299-5p mimic+pc-NC组及MPP++miR-299-5p mimic+pc-SP1 组,除对照组外、其余各组细胞制作PD模型并相应处理;细胞经质粒转染后分别检测miR-299-5p、SP1 mRNA的表达;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色检测小鼠中脑组织及SH-SY5 Y的细胞凋亡、流式细胞术检测细胞凋亡率,采用双萤光素酶报告检测miR-299-5p与SP1 的靶向关系,蛋白印迹法检测活化半胱氨酸蛋白3(Cleaved Caspase-3)、SP1、第 10 号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/总AKT(t-AKT)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/总mTOR(t-mTOR)的表达.结果 实验结果显示,与对照组相比,PD组小鼠中脑miR-299-5p表达下调,SP1 表达上调(P＜0.01),中脑组织中细胞凋亡率增加(P＜0.01),Cleaved Caspase-3 和 PTEN 蛋白表达上调(P＜0.05 或 P＜0.01),p-AKT/t-AKT和p-mTOR/t-mTOR表达水平下调(P＜0.05),PD+Ad-miR-299-5p组结果则与PD组结果相反;双萤光素酶实验结果表明miR-299-5p靶向下调SP1 的表达;与PD+Ad-miR-299-5p+Ad-NC组相比,PD+Ad-miR-299-5p+Ad-SP1 组小鼠中脑组织中细胞凋亡率增加,Cleaved Caspase-3 蛋白表达上调(P＜0.01);PD+Ad-miR-299-5p+Ad-SP1 组较PD+Ad-miR-299-5p组PTEN蛋白表达上调,p-AKT/t-AKT和p-mTOR/t-mTOR表达水平下调(P＜0.05);体外细胞实验结果与体内结果一致.结论 miR-299-5p 靶向SP1 可抑制PD模型细胞的凋亡,其机制可能与PTEN/AKT/mTOR通路有关.