换一批细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In™ CHO细胞系的建立
Establishment of Flp-InTM CHO cell line with C239S mutant stably expressing cytochrome P450 3A4
摘要目的 构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的 Flp-InTM CHO 细胞系.方法 使用 Lipofectamine2000 转染试剂将 pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S 突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-InTM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性.结果 与Flp-InTM CHO-空质粒组相比,Flp-InTM CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P＜0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P＜0.001).结论 成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-InTM CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础.
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关键词
细胞色素P450 3A4黄曲霉毒素B1突变体稳定表达Flp-InTM CHO细胞cytochrome P450 family 3 subfamily A member 4(CYP3A4)aflatoxin B1mutantstable expressionFlp-In? CHO cells
栏目名称
DOI
10.19367/j.cnki.2096-8388.2023.12.004
发布时间
2024-01-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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