换一批
换一批幽门螺杆菌东亚型菌株GZ7/cagA+和GZ7/△cagA源外膜囊泡的蛋白组学比较
Proteomic comparison of outer membrane vesicles of Helicobacter pylori GZ7/cagA+and GZ7/△cagA
摘要目的 通过分离、鉴定和比较细胞毒素相关基因A蛋白(cagA)、阳性幽门螺杆菌(H.pylori)、东亚型菌株GZ7/cagA+及其cagA敲除菌株GZ7/△cagA来源的外膜囊泡(OMVs)中的差异表达蛋白(DEPs),分析ca-gA基因对OMVs中蛋白表达的影响.方法 采用超速离心法分别提取GZ7/△cagA和GZ7/cagA+的OMVs,通过透射电镜和纳米颗粒追踪技术鉴定其形态和粒径,使用Western blot技术验证两组OMVs中cagA蛋白的表达,分析OMVs的蛋白质组学;对蛋白组学数据进行质控分析和主成分分析鉴定后,以上调蛋白倍数变化(FC)＞2.0、下调蛋白FC＜0.5,FDR≤0.05为筛选条件筛选DEPs,利用OmicsBean在线工具、Gene Ontology和KOBAS对DEPs进行生物信息学分析;采用免疫荧光鉴定OMVs细胞在细胞中的定位,实时无标记细胞分析仪检测细胞活性.结果 通过电镜和粒径证实成功分离纯化了 OMVs;蛋白质组分析发现,GZ7/cagA+-OMVs组与GZ7/△cagA-OMVs组比较有79个DEPs,其中38个蛋白下调、41个蛋白上调;生物信息学分析显示,DEPs主要与丙酮酸代谢、丙酸代谢、糖酵解/糖异生及柠檬酸循环等代谢途径有关;免疫荧光和实时无标记细胞分析证实H.pylori来源的OMVs能进入细胞并定位在线粒体并抑制细胞增殖.结论 cagA能影响H.pylori分泌的OMVs中蛋白质的成分,DEPs可能促进cagA+H.pylori在胃黏膜上的定植及致病性.
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关键词
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白胃癌蛋白组差异表达蛋白线粒体Helicobacter pylori outer membrane vesiclescytotoxin-associated gene A proteingastric cancerproteomedifferentially expressed proteinsmitochondria
分类号
R329.2
栏目名称
DOI
10.19367/j.cnki.2096-8388.2024.05.002
发布时间
2024-06-26
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