抗肿瘤肽Mt5对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响及机制
Effect of antitumor peptide Mt5 on proliferation and apoptosis of human hepatoma cells and its mechanism
摘要目的 探讨抗肿瘤肽Mt5通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用pymol构建Mt5的三维可视化结构示意图,Prot Param分析Mt5的正电荷和疏水性,NPS分析Mt5的α-螺旋所占比例;运用实时无标记细胞分析(RTCA)技术检测不同浓度Mt5(50 mg/L、100mg/L、200 mg/L、400 mg/L)作用后的HepG2细胞活力;通过实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)法检测不同浓度 Mt5(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用后 HepG2 细胞中 PI3K、AKT 信使 RNA(mRNA)表达;以 Western blot法检测不同浓度Mt5(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bax)和PI3K、AKT蛋白表达.结果 生物学信息结果表明,Mt5的正电荷为+8,疏水性为0.588,α-螺旋度为84.62%;RTCA结果显示Mt5不同浓度处理组作用后,HepG2细胞指数随着Mt5浓度的增大和时间的延长逐渐降低至0以下;qPCR结果显示,Mt5组HepG2细胞中PI3K和AKT mRNA较阴性对照组表达降低(P<0.05),bax蛋白表达较阴性对照组升高(P<0.05),且呈浓度依赖性;Western blot结果显示,Mt5组HepG2细胞中Bcl-2、PI3K及AKT蛋白表达较阴性对照组降低(P<0.05),且呈浓度依赖性.结论 Mt5可抑制人肝癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
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