换一批
换一批稳定表达细胞色素P450 2B6的Flp-InTM CHO细胞系的建立及鉴定
Establishment and identification of a Flp-InTM CHO cell line for stable expression of cytochrome P450 2B6
摘要目的 构建稳定表达细胞色素P450 2B6(CYP2B6)的Flp-InTM CHO细胞系.方法 将Flp-InTM CHO细胞分为 Flp-InTMCHO 组、Flp-InTMCHO 空载体组及 Flp-InTMCHO-CYP2B6 组,通过 Lipofectamine2000 转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-InTM CHO空载体组细胞和Flp-InTM CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-InTM CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性.结果 与Flp-InTMCHO组和Flp-InTMCHO空载体组相比,Flp-InTMCHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.01)、酶活性显著增加(P＜0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P＜0.001).结论 成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-InTMCHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具.
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关键词
细胞色素P450 2B6稳定表达酶活性环磷酰胺Flp-InTM CHO细胞系cytochrome P450 2B6stable expressionenzyme activitycyclophosphamideFlp-InTM CHO cell line
分类号
R966
栏目名称
基础研究
DOI
10.19367/j.cnki.2096-8388.2024.10.004
发布时间
2024-11-25
基金项目
国家自然科学基金
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