摘要目的 探究葛根素(PUE)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞自噬和凋亡的调控作用及潜在机制.方法 通过中药系统药理学(TCMSP)等数据库筛选PUE靶标,整合数据库中的NSCLC相关基因,进行目标交集分析,确定共同靶点;构建蛋白质互作网络(PPI),进行基因本体论(GO)功能注释,京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析及分子对接验证;为验证上述预测,取NSCLC细胞株A549和H1299设置对照组、PUE组、雷帕霉素(Rapa)阳性对照组、吉非替尼(EGFRi)组以及EFGRi+PUE组,采用细胞增值毒性试验(CCK-8)与乳酸脱氢酶(LDH)法评估细胞活力,实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测自噬与凋亡相关基因即自噬相关激酶1(ULK1)、螯合体1(P62)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)、AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白1轻链3β(LC3BⅡ/Ⅰ)、ULK1、P62、LDHA、磷酸化AMP激活的蛋白激酶(P-AmpK)、泛素化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase3)蛋白的表达,免疫荧光观察自噬相关蛋白P62与LC3B的变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平、线粒体膜电位及活性氧(ROS)水平,分析葛根素对表皮生长因子受体(EGFR)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及ULK1信号通路蛋白的调控作用.结果 通过网络药理学与分子对接技术筛选出PUE抗NSCLC的9个关键靶基因,确认PUE与EGFR等多个关键靶基因紧密结合;GO与KEGG分析揭示PUE可能通过调控信号转导、凋亡、细胞增殖及PI3K/AKT等通路发挥抗NSCLC作用;体外细胞实验表明,与对照组比较,A549 细胞的 PUE 半数致死浓度(LC50)为0.50 mmol/L(P＜0.05),H1299 的 LC50 为 1.00 mmol/L(P＜0.05);PUE浓度为0.25 mmol/L时,A549和H1299细胞的数量分别下降了 57.95％和69.35％(P＜0.05);PUE处理诱导A549和H1299细胞,自噬和凋亡基因ULK1、BCL2表达上调,LDHA、AMPK及P62基因表达下调,自噬相关蛋白LC3BⅡ/Ⅰ 及 ULK1 上调,P62、LDHA 及 EFGR 蛋白下调(P＜0.05),A549 细胞中 Cleaved-caspase3 表达蛋白上调(P＜0.05);流式细胞术显示,PUE处理A549和H1299细胞均能诱导细胞早期凋亡(P＜0.05),下调ROS水平和线粒体膜电位水平(P＜0.05);免疫荧光显示,PUE处理后增强了 A549和H1299细胞LC3B荧光信号,减弱了 P62 荧光信号(P＜0.05);PUE、EFGRi 及 EFGRi+PUE 处理 A549 和 H1 299 细胞,下调了 EGFR、PI3K、AKT、mTOR 相关通路基因(P＜0.05),及 P-EGFR、EGFR、P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT 和 mTOR 等 7 个关键通路蛋白(P＜0.05),且在抑制EGFR后效果增强(P＜0.05),证实PUE通过EGFR介导的PI3K/AKT/mTOR/ULK1通路发挥抗NSCLC作用.结论 PUE可能通过EGFR介导了 PI3K/AKT/mTOR/ULK1通路,调控NSCLC细胞株A549和H1299的自噬与凋亡,从而发挥抗NSCLC的作用.