摘要目的 构建携带小鼠Schlafen3(Slfn3)基因的重组过表达质粒,并观察其在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率.方法 从GenBank基因数据库获取小鼠Slfn3基因序列,利用VectorNTI软件对其进行引物设计,通过PCR扩增获得目的基因,将所得到的目的基因与穿梭载体pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG相连接,获得重组腺病毒载体pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG;筛选阳性克隆抽提质粒,通过限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并通过DNA测序验证;采用Admax系统将目的穿梭质粒和腺病毒骨架质粒一同转染HEK293细胞获得重组腺病毒(Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG),对其进行病毒滴度测定,Western blot验证Slfn3蛋白的表达;体外培养小鼠脾源EPCs 5～7 d,细胞密度达70％后,用Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG进行转染48 h后,采用荧光显微镜观察并统计绿色荧光细胞数量,计算Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CM V-Slfn3-3xFLAG 转染的效率.结果 DNA 测序验证 Ad-pcADV-EF1-mNeonGreen-CMV-Slfn3-3xFLAG构建成功,病毒滴度为3.16 × 1010(ifu/mL);腺病毒包装之后的重组腺病毒能够转染HEK293细胞,并在细胞中表达Slfn3-EGFP-3xFLAG融合蛋白,且含有Flag标签的蛋白,大小为57 kDa;重组腺病毒在EPCs中的转染效率为(71.43±2.58)％.结论 成功地构建了小鼠Slfn3的过表达重组腺病毒载体,且在EPCs转染效率较高.