摘要目的:优选木芙蓉叶总黄酮的聚酰胺-大孔树脂联用纯化工艺,并建立木芙蓉叶中黄酮类组分的HPLC分析方法,为该有效部位的开发提供参考.方法:以木芙蓉叶中总黄酮纯度为指标,采用单因素联合正交试验优化木芙蓉叶总黄酮的纯化工艺,考察的工艺参数包括上样液浓度、最大上样量、上样流速、水洗用量、洗脱剂浓度及用量、洗脱流速、聚酰胺与大孔树脂柱体积比等,确定最佳纯化工艺.结果:木芙蓉叶总黄酮的最佳纯化工艺为:聚酰胺树脂10 g,浓度为0.16 g生药/mL的木芙蓉叶提取液100 mL,上样流速为1.0 mL/min,先用10 BV的蒸馏水洗,然后用2.5 BV 20%的乙醇除杂,将除杂后的聚酰胺加入AB-8 大孔树脂顶部,聚酰胺与大孔树脂柱体积比为1∶2,用4 BV(聚酰胺体积)80%的乙醇以1.5 mL/min的流速进行洗脱,收集洗脱液,水浴挥干,得到木芙蓉叶总黄酮纯化物,纯化后,木芙蓉叶总黄酮纯度达 70%左右.木芙蓉叶中 5 种黄酮类单体成分(芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素、山柰酚)的HPLC分析方法为:乙腈-0.5%冰乙酸,梯度洗脱;检测波长:370 nm;柱温:35℃;流速:1 mL/min;进样量:10 μL.结论:聚酰胺-大孔树脂联用对木芙蓉叶中总黄酮的纯化效果好,操作简单,效率高,稳定性好,适用于木芙蓉叶中总黄酮提取物的纯化.
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