换一批基于E165R基因非洲猪瘟LAMP快速检测方法的建立
Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification(LAMP)Based on E165R Gene for ASFV Rapid Detection
摘要[目的]建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考.[方法]通过对非洲猪瘟病毒多种基因型66个毒株的E165R基因多序列比对,选取相对保守区域设计LAMP引物,并对反应条件及反应体系进行优化.在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性.[结果]选取的LAMP检测靶标235 bp(29～264 bp)在不同基因型ASFV毒株中保守性较好,序列相似度达94.46％～100％;LAMP反应的最佳温度为64℃、时间为35 min、Mg2+浓度为8 mmol/L、内外引物比为8 ∶1、Bst DNA聚合酶量为16 U.建立的ASFV环介导等温扩增检测方法最低检测限为50 copies/μL,较常规PCR检测提高1个数量级,且35 min即可完成扩增反应.LAMP检测方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)4种临床症状类似的猪病毒感染性疫病没有交叉反应.[结论]基于该新检测靶点的ASFV LAMP检测具有良好的特异性,可成功区分与ASFV感染临床症状相似的猪感染性疾病,且灵敏度优于常规PCR检测方法,方法简单、检测成本低,可实现ASFV的特异、灵敏、快速检测.
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分类号
S858.28
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-3601.2023.03.011
发布时间
2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
福建省自然科学基金项目（2020J01181）
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