换一批抗-Cry2Aa单链抗体分子互作及荧光免疫检测研究
Time-resolved Fluorescence Immunoassay and Molecular Recognition Mechanism of the Single Chain Variable Fragment against the Cry2Aa Toxin
摘要Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义.本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键结合位点,以此为基础将单链抗体作为检测抗体,建立了间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法,对大米样品中Cry2Aa毒素进行了检测.利用生物信息学工具模拟获得单链抗体三维结构模型,分子对接结果显示重链可变区81Ny82和121SGNY124区域及轻链可变区的245YSSN248氨基酸残基在与毒素结构Ⅱ区识别过程中起关键作用,为建立高效检测方法奠定基础,进一步基于该单链抗体建立的时间分辨检测方法灵敏度(IC10)为0.08 ng/mL,中抑制浓度(IC50)为7.99 ng/mL,线性检测范围(IC20～IC80)为0.24～263.77 ng/mL,且与常规双抗夹心ELISA法检测呈良好线性关系.
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关键词
Cry2Aa毒素单链抗体时间分辨荧光免疫分析同源模建分子对接Cry2Aa toxinsingle chain variable fragment (scFv)time-resolved fluorescence immunoassay (TRFIA)homology modelingmolecular docking
栏目名称
DOI
10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.6.045
发布时间
2017-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省自然科学基金青年项目（BK20150114）
江苏省高等学校自然科学研究项目（14KJB21004）
金陵科技学院科研启动基金（jit-6-201518）
金陵科技学院校级科研项目（C140501）
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