换一批LfcinB与EGFP融合蛋白在毕赤酵母中的胞内表达与分离纯化
Intracellular Expression,Isolation and Purification of LfcinB and EGFP Fusion Protein in Pichia pastoris
摘要该研究将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段与抗菌肽牛乳铁蛋白肽(LfcinB-His)基因片段的N末端连接,构建以EGFP为报告基因的胞内表达载体,融合表达重组蛋白EGFP-LfcinB-His,并对其进行活性检测.将重组表达质粒电转入毕赤酵母GS115中,筛选阳性转化子,甲醇诱导其发酵表达,488 nm的激发光下检测到较强的荧光.当酵母细胞培养达到最高密度后,收集菌体细胞,破壁,用酵母细胞蛋白裂解液进行裂解.裂解液经过超滤浓缩、Ni-NTA亲和层析、甲酸裂解等纯化步骤后,Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量为4.1 ku的目标蛋白(LfcinB-His)条带.通过液质联用测定与分析,最终获得了纯度为90.32％的LfcinB-His超滤浓缩液,对测试的6株致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌浓度范围在16～64 μg/mL.综上,该研究为毕赤酵母表达小分子多肽提供了较好的方法学参考,也为进一步研究LfcinB的生物活性及高密度发酵奠定了基础.
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关键词
牛乳铁蛋白肽绿色荧光蛋白毕赤酵母融合表达蛋白纯化bovine lactoferricingreen fluorescent proteinPichia pastorisfusion expressionprotein purification
栏目名称
DOI
10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.12.1223
发布时间
2025-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
四川省科技计划项目（2022JDZH0036）
四川省科研院所科技成果转化基金项目（22YSZH0016）
江苏大学高水平大学-师资建设-科研启动基金（4111360007）
江苏大学高级专业人才科研启动基金项目（12JDG069）
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