转基因玉米MON87411双重微滴式数字PCR定量检测方法的建立
Establishment of A Quantitative Duplex Droplet Digital PCR Detection Method for Genetically Modified Maize MON87411
摘要基于微滴式数字PCR技术,建立了转基因玉米MON87411双重微滴式数字PCR定量检测方法.试验结果显示,该方法仅有玉米MON87411能特异性检出,其他样品均无扩增反应.扩增稳定性试验,3次平行扩增内外源基因拷贝数RSD分别为0.56%和3.93%,均符合RSD小于25%的要求.线性相关性曲线显示,当模板DNA质量浓度在50~0.08 ng/μL之间时,目标序列拷贝数与模板DNA浓度具有良好的线性关系,相关系数R2均大于0.99,品系特异性序列定量线性范围在26.6~17 086.6拷贝之间,定量限(LOQ)为1.34拷贝/μL.准确度试验,五个不同质量浓度模板DNA平均拷贝数含量分别为52.14%、63.09%、66.08%、60.50%、52.16%,均在理论拷贝数含量范围内.综上所述,该研究建立的双重微滴式数字PCR定量检测方法特异性强,稳定性好,定量范围广,灵敏度和准确度高,可以用于转基因玉米MON87411的定量检测.
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