换一批基于MIRA-CRISPR/Cas12a技术的苏黎世克罗诺杆菌快速检测方法建立
Establishment of A Rapid Detection Method for Cronobacter turicensis Based on Multienzyme Isothermal Rapid Amplification-CRISPR/Cas12a
摘要该研究针对婴幼儿配方奶粉中重点监测的致病性苏黎世克罗诺杆菌,利用多酶恒温快速扩增技术(Multienzyme Isothermal Rapid Amplification,MIRA)和CRISPR/Cas12a检测系统,开发了一种快速检测体系.基于苏黎世克罗诺杆菌的CTU_22970 基因序列,设计了特异性MIRA引物和CrRNA,通过MIRA技术扩增得到靶标DNA,靶标DNA的存在可以激活CrRNA-Cas12a复合物的反式切割活性,最后通过胶体金侧向流层析试纸条技术实现检测信号的读出.该研究所构建的检测体系具有良好的特异性与灵敏度,经验证,克罗诺杆菌属内不同菌种与非克罗诺杆菌株的存在均不会激活Cas12a的反式切割功能.该体系可在 1.5 h内完成检测,对纯培养物的检出限为 1 CFU/mL,对实际样品的检测,初始含菌量为 105 CFU/g的奶粉样品不增菌即可检出,初始含菌量为 104、103、102、101、100 CFU/g的奶粉样品分别需要预孵育2、4、6、8、10 h检出.检测过程操作简单,不依赖大型仪器设备,无需专业培训,适用于现场化的检测应用,对食品中苏黎世克罗诺杆菌的控制具有重要的实际意义.
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关键词
苏黎世克罗诺杆菌CRISPR/Cas12a胶体金侧向流层析快速检测Cronobacter turicensisCRISPR/Cas12acolloidal gold-based lateral flow immunochromatographyrapid detection
栏目名称
DOI
10.13982/j.mfst.1673-9078.2025.6.0490
发布时间
2025-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2023YFC2605100）
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