经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达及凋亡的调控机制
Regulatory Mechanism of Drug-Containing Serum of Jinghou Zengzhi Prescription on GDF9 Expression and Apoptosis of Ovarian Granulosa Cells in Rats with Controlled Ovarian Hyperstimulation
摘要[目的]观察益气血法经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞生长分化因子9(GDF9)表达及凋亡的调控机制.[方法]制备超排卵大鼠血清(空白血清)和经后增殖方灌胃的超排卵大鼠血清(含药血清).建立控制性超排卵(COH)大鼠模型,收集卵巢颗粒细胞.实验分为5组:空白血清组,含药血清组,含药血清+ SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]组,含药血清+PDTC[核转录因子κB(NF-κB)抑制剂]组,含药血清+SB203580+PDTC组.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测p38MAPK、酪蛋白激酶2(CK2)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB、GDF9 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测GDF9蛋白表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡.[结果]经后增殖方含药血清降低COH大鼠卵巢颗粒细胞的p38MAPK和NF-κB mRNA表达,升高CK2和IκBα mRNA表达,提高GDF9 mRNA和蛋白的表达水平,降低卵巢颗粒细胞的凋亡率.单独添加p38MAPK抑制剂SB203580与单独添加NF-κB抑制剂PDTC均能促进GDF9 mRNA和蛋白表达、降低卵巢颗粒细胞凋亡率.[结论]益气血法经后增殖方含药血清可促进超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与调控p38MAPK和NF-κB双信号通路基因表达有关.
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