半枝莲总黄酮通过Smad4/PKM2/HIF?1α改善高糖诱导的足细胞损伤的机制研究

Total flavonoids of Scutellaria barbata improving podocyte injury induced by high glucose through Smad4/PKM2/HIF?1α pathway

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摘要目的:观察半枝莲总黄酮(TF?SB)对高糖诱导的足细胞(MPC?5)损伤及Smad4/PKM2/HIF?1α信号通路的影响.方法:首先采用CCK8法分析TF?SB对MPC?5细胞的安全性及药效浓度.随后MPC?5分为空白组、模型组和TF?SB组,除空白组外,模型组和TF?SB组采用高糖诱导建立MPC?5细胞损伤模型,分别检测TF?SB对MPC?5细胞ATP、凋亡和ROS水平的影响,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子(IL?1β、TNF?α、MCP?1)含量,反转录聚合酶链反应(RT?PCR)检测糖酵解基因(GLU1、PFK1和HK1)表达丰度,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Smad4/PKM2/HIF?1α信号通路中相关蛋白的表达水平;结果:与空白组相比,模型组MPC?5细胞ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著下降,凋亡和ROS水平、IL?1β、TNF?α与MCP?1的含量均显著增加(P＜0.01);与模型组相比,TF?SB组ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著升高,凋亡和ROS水平、IL?1β、TNF?α与MCP?1的含量均显著降低(P＜0.01).此外,与空白组相比,模型组Smad4、HIF?1α蛋白表达及细胞核中PKM2表达显著升高,细胞质中PKM2表达显著降低(P＜0.01);与模型组相比,TF?SB组Smad4、HIF?1α表达及细胞核中PKM2表达显著降低,而细胞质中PKM2表达显著升高(P＜0.01);结论:TF?SB促进MPC?5细胞线粒体活性诱导糖酵解,进而抑制炎症的分泌,达到治疗糖尿病肾病的作用可能与通过抑制Smad4/PKM2/HIF?1α信号通路有关.