人脐带间充质干细胞源外泌体负载刺槐素的制备方法研究

Research on preparation method of acacetin loaded on exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells

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摘要目的:构建刺槐素(Acacetin)的外泌体(Exosomes,EXOs)递药系统.方法:以人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUMSCs)来源外泌体为药物载体,采用共孵育法、超声法和反复冻融法 3种方式包载刺槐素,制备负载刺槐素的外泌体(EX-Aca).采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定EX-Aca包封率和载药率.透射电镜(TEM)、粒径分析和Western Blot对EXOs和EX-Aca 的表征进行检测,通过体外毒性实验检测Ex-Aca的安全性,同时考察其细胞摄取能力.结果:通过高效液相色谱计算得出共孵育法包封率及载药率均高于超声法和反复冻融法.当刺槐素浓度为80 μg/mL时,包封率和载药量最高,分别为91.90%和19.68%.透射电镜(TEM)下EXOs和EX-Aca均呈杯碟状,平均粒径分别为(102.356 96±0.656 23)nm和(117.300 38±0.747 83)nm,呈现典型外泌体特性.Western Blot均检测到EXOs和EX-Aca表面标志物CD9、ALIX和TSG101的蛋白表达.因此,EX-Aca的最优制备方法参数为:刺槐素浓度为80 μg/mL,与hUMSCs来源外泌体4℃共孵育48 h.体外实验验证了EX-Aca对细胞低毒性,细胞存活率>94%且EX-Aca可被BV2细胞摄取.结论:成功构建刺槐素的外泌体递药系统,制备的EX-Aca对细胞具有低毒性,具有一定靶向性.