换一批半悬浮组织器官培养法提取原代大鼠脂肪间充质干细胞及其鉴定
Semi-suspension organ culture method for the separation and culture of primary rat fatty mesenchymal stem cells and their identification
摘要目的:采用"半悬浮组织器官培养法"提取原代大鼠脂肪间充质干细胞(AD-MSCs),为开展再生医学及组织损伤修复等研究提供理想的细胞来源.方法:无菌分离3周龄雄性SD大鼠双侧腹股沟和附睾处的脂肪垫,经消毒、漂洗、剪碎、0.1%Ⅱ型胶原酶消化30 min后,严格精准地控制低糖型DMEM完全培养液用量,进行"半悬浮"原代培养;当细胞生长融合度达到90%时进行传代扩增.通过细胞形态学观察、细胞表面标志物CD分子检测、成脂/成骨诱导分化实验鉴定所培养的目的细胞.结果:原代接种培养6～8 d后,贴壁生长的短梭形细胞铺满皿底,呈"成纤维样"漩涡式排列生长;细胞传代至第8代时其形态基本保持不变,未见明显"蝉翼样"变宽分化现象.第 4代细胞表面标志物CD分子流式检测结果高表达CD90(97.3%)、CD73(96.7%)、CD44(84.1%),低表达CD34(0.4%)、CD45(8.1%)、CD11b/c(3.6%);诱导成脂、成骨分化实验均为阳性.结论:"半悬浮组织器官培养法"能够成功提取原代大鼠AD-MSCs.
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关键词
脂肪间充质干细胞半悬浮组织器官培养法原代培养干细胞表面标志物三系分化潜能Adipose-derived mesenchymal stem cellsSemi-suspension organ culture methodPrimary cultureSurface markers of stem cellsTrilinear differentiation potential
分类号
R-33（实验医学、医学实验）
栏目名称
DOI
10.13210/j.cnki.jhmu.20250425.003
发布时间
2025-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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