拟南芥Alpha-dioxygenase 1的原核表达、纯化及活性的检测

Expression, Purification and Activity Analysis of Arabidopsis-dioxygenase 1

二维码有效期 120s

摘要从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测.利用原核表达载体pMAL-c4x在T7在Express Competent E.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Resin亲和层析柱纯化.SDS-PAGE结果表明,重组融合蛋白在BL21(DE3)-RIPL codon+中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主,表达率约3.7%,纯化的DOX1纯度可达45%.愈创木酚法表明,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性;2,4-DNP法测试表明可溶性重组蛋白具有脂肪酸双加氧酶活性.

作者张小梅 ^[1] 韩念法 ^[2] 张美祥 ^[2] 李广录 ^[3] 范三红 ^[3] 郭蔼光 ^[4] 学术成果认领

作者单位西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;河南科技大学,农学院,河南,洛阳,471003 ^[1] 西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100 ^[2] 河南科技大学,农学院,河南,洛阳,471003 ^[3] 西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西,杨凌,712100 ^[4]

关键词 Alpha-dioxygenase 1 重组表达 2,4-DNP 亲和纯化活性

分类号 Q786

发布时间 2008-09-01

基金项目

国家自然科学基金 西北农林科技大学校科研和教改项目