拟南芥 CPK10双元 TAP 载体的构建及原生质体表达
Construction of Binary Vector for TAP and Protoplast Expression of CPK10 in Arabidopsis
摘要为了研究拟南芥 CPK10发挥功能的分子机理,通过 PCR 扩增克隆了 CPK10基因,将该基因连接到带有FLAG 和 HA 标签的双元串联亲和层析载体上,构建成 pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10植物表达载体,进而通过 PEG 介导转化拟南芥野生型原生质体,表达约10 h,通过 Western Blotting 检测融合有 FLAG 和 HA 标签的 CPK10蛋白的表达情况,结果显示,可以分别利用 FLAG 抗体和 HA 抗体特异检测到 CPK10蛋白的条带。融合蛋白的成功表达,为进一步通过串联亲和纯化技术(TAP)筛选 CPK10的互作蛋白奠定基础。
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