换一批
换一批藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达
Cloning of Tibetan Pig IGF-1 Mature Peptide Gene and Its Prokaryotic Expression
摘要旨在克隆藏猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)的成熟肽基因,并进行原核表达的研究.提取藏猪肝脏组织RNA,通过RT-PCR扩增出藏猪IGF-1全长基因,构建重组质粒pMD19-T-IGF-1,以pMD19-T-IGF-1质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽序列并构建成熟肽pET-32α-IGF-1表达质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),对IPTG诱导剂浓度和诱导时间进行优化,Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western Blot对其鉴定.结果显示,IGF-1成熟肽基因(315 bp),成功构建了成熟肽pET-32α-IGF-1原核表达质粒;重组大肠杆菌BL21-IGF-1以包涵体形式表达出分子量约31 kDa融合蛋白,最优IPTG浓度为0.5 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为10 h;纯化获得了高纯度的融合蛋白,经鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白.结果表明,成功构建了表达质粒pET32α-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF-1,表达了藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白及该蛋白具有抗原抗体反应活性.
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DOI
10.7668/hbnxb.2017.01.013
发布时间
2017-05-26
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