换一批暗黑鳃金龟几丁质酶基因的克隆、表达及活性分析
Gene cloning, expression and activity analysis of chitinase Hpchi from Holotrichia parallela (Coleoptera: Motschulsky)
摘要本研究通过免疫筛选暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA表达文库,获得其几丁质酶基因Hpchi.序列分析表明Hpchi开放阅读框长1 443 bp,编码480个氨基酸,预测分子量为51.4 kDa.Hpchi蛋白N-端带有18个氨基酸的信号肽,C-端存在有一个几丁质结合结构域,催化区位置显示有特异活性位点,判定Hpchi蛋白属于Ⅰ型的几丁质酶.分别构建原核和真核表达载体,转化到大肠杆菌BL21和昆虫细胞系sf9,BTI-Tn-5BI-4(Highfive)中进行表达.SDS-PAGE和Western Bolt杂交试验显示,Hpchi重组蛋白在大肠杆菌及昆虫细胞系中都获得了成功表达.酶活分析表明真核表达的Hpchi重组蛋白具有几丁质酶活性.
更多相关知识
关键词
暗黑鳃金龟cDNA表达文库几丁质酶真核表达系统活性分析Holotrichia parallelacDNA expression librarychitinaseeukaryotic expressionactivity analysis
DOI
10.13320/j.cnki.jauh.2014.0147
发布时间
2016-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览3
- 被引2
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
