X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

X-Chromosome Linked Apoptosis Inhibitor-associated Protein Factor 1 Regulates Caspase 1-mediated Pyroptosis of Gastrointestinal Stromal Tumor Cells via Autophagy Pathway

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摘要目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制.方法:实时荧光定量 PCR 和 West-ern blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和 GIST 细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1 的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1 重组质粒染进GIST-882 细胞,以构建高表达XAF1 的GIST-882 细胞.GIST-882 细胞分为对照组、pcDNA3.1 组(转染 pcDNA3.1 空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1 组(转染pcDNA3.1-XAF1 重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap 组(转染 pcDNA3.1-XAF1 重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白 1 轻链3(LC3)表达情况,Western blot 检测各组细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与 Beclin1 蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18 含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1 及其活化形式 cleaved-Caspase-1、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素 D(GSDMD)蛋白表达水平.结果:与RGM-1 细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcD-NA3.1-XAF1 组GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1 组、对照组(P<0.05).与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及 LDH 释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1 组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05).结论:XAF1 在 GIST 细胞中表达下降,提高 XAF1 表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1 介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用.