瑞香素调节AMPK/mTOR信号通路对IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响

Impacts of daphnetin on IL-1β-induced autophagy and apoptosis of articular chondrocytes by regulating the AMPK/mTOR signaling pathway

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摘要目的探究瑞香素(DAP)调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对白介素-1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响.方法将大鼠关节软骨细胞随机分为对照组(Control组,空白培养基处理)、模型组(Model组,10 ng/ml IL-1β)、低浓度DAP组(DAP-L组,10 ng/ml IL-1β+30 mg/L DAP)、高浓度DAP组(DAP-H组,10 ng/ml IL-1β+60 mg/L DAP)、高浓度DAP+AMPK抑制剂Compound C组(DAP-H +CC组,10 ng/ml IL-1β+60 mg/L DAP+10 μmol/L CC).CCK-8法检测细胞增殖能力.ELISA法测定细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.流式细胞术测定细胞凋亡率.实时荧光定量 PCR 检测细胞中AMPK、mTOR mRNA的表达.Western Blot法检测细胞中AMPK/mTOR信号通路相关蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3 的表达.单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色观察细胞自噬.结果与 Control组比较,Model组关节软骨细胞OD450 值(48、72 h)、AMPK mRNA表达和蛋白磷酸化水平、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达、MDC阳性细胞比例显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、炎性因子TNF-α、IL-6 水平、mTOR mRNA表达和蛋白磷酸化水平、Bax蛋白表达显著上升(P<0.05).与 Model 组比较,DAP-H 组关节软骨细胞相关指标变化与上述相反(P<0.05).Compound C减弱了DAP对IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬的促进作用,促进了细胞凋亡.结论 DAP可能通过激活AMPK/mTOR信号通路促进IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡.