miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究
MiR-105-5p regulates fatty acid metabolism and biological behaviors of gastric cancer cells by targeting SIRT1
摘要目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸 代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子 1(SIRT1)基因的靶向关系.方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2 细胞,将不同质粒转染到HepG2 细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1 组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1).MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1 及FABP5 表达水平.生物信息预测miR-105-5p与SIRT1 的靶向作用关系,并使用荧光素酶报告实验验证.结果 HepG2 细胞miR-105-5p表达水平高于GES-1 细胞,SIRT1 蛋白、基因mRNA表达水平低于GES-1细胞(P<0.01).miR-105-5p组细胞 48 h、72 h OD值,侵袭及迁移细胞数量,磷脂含量、三酰甘油含量及FASN、ACC1、FABP5 蛋白水平高于miR-NC组,si-miR-105-5p组细胞 48 h、72 h OD值,侵袭及迁移细胞数量,磷脂含量、三酰甘油含量及FASN、ACC1、FABP5 蛋白水平低于NC组(P<0.01).miR-105-5p+Scramble组细胞48 h、72 h OD值,侵袭及迁移细胞数量,磷脂含量、三酰甘油含量及FASN、ACC1、FABP5 蛋白水平高于Scramble组,miR-105-5p+sh-SIRT1 组细胞 48 h、72 h OD值,侵袭及迁移细胞数量,磷脂含量、三酰甘油含量及FASN、ACC1、FABP5 蛋白水平低于miR-105-5p+Scramble组(P<0.01).miR-105-5p组细胞SIRT1 蛋白水平低于miR-NC组,si-miR-105-5p组细胞SIRT1 蛋白水平高于NC组(P<0.01).miR-105-5p与SIRT1 3'UTR存在碱基互补配对位点.miR-105-5p+WT-SIRT1 组细胞荧光素酶活性低于miR-NC+WT-SIRT1 组(P<0.01).结论 miR-105-5p可通过SIRT1 调节脂肪酸代谢来抑制胃癌细胞增殖、侵袭及迁移.
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