柴胡桂枝干姜汤调节Toll样受体4/核因子κB/NOD样受体蛋白3信号通路对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝脏炎症反应和纤维化的影响

Impacts of Chaihu Guizhi Ganjiang Decoction on liver inflammation and fibrosis in mice with non-alcoholic steatohepatitis by regulating the TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway

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摘要目的探讨柴胡桂枝干姜汤通过调节Toll样受体4/核因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏炎症反应和纤维化的影响.方法构建小鼠NASH模型,将小鼠分为5组:正常饮食组(NOR组)、蛋氨酸胆碱缺乏饮食组(NASH组)、柴胡桂枝干姜汤低剂量组(CGGD-L组,6 g/kg)、中剂量组(CGGD-M组,12 g/kg)、高剂量组(CGGD-H组,24 g/kg).苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝组织病理变化;天狼星红(Sirius red)染色观察纤维化程度;自动生化分析仪测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)水平;酶联免疫吸附法(ELLISA)检测肝脏组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ型胶原蛋白α链(Col Ⅰ α)、结缔组织生长因子(CTGF)、组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4、p-NF-κB、NF-κB、NLRP3蛋白表达.结果 NASH组小鼠出现明显的肝脏大泡脂肪性变性和炎症细胞浸润,AST、ALT、TG、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量,Col Ⅰ α、CTGF、TIMP1 的 mRNA 表达及 α-SMA、TLR4、p-NF-κB、NF-κB、NLRP3蛋白表达,均较NOR组显著增加(P＜0.05);与NASH组比较,CGGD-L组、CGGD-M组、CGGD-H组小鼠AST、ALT、TG、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量,Col Ⅰ α、CTGF、TIMP1 的 mRNA 表达及 α-SMA、TLR4、p-NF-κB、NF-κB、NLRP3蛋白表达呈剂量依赖性降低(P＜0.05).结论柴胡桂枝干姜汤通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻NASH小鼠肝脏炎症和纤维化.