槲皮素对宫颈癌Hela/DDP细胞顺铂耐药性的影响及作用机制研究
Effect of quercetin on cisplatin resistance on cervical cancer HeLa/DDP cells and the underlying mechanism
摘要目的 探究槲皮素对宫颈癌Hela/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能作用机制.方法 体外培养人宫颈癌Hela/DDP、Hela细胞,按如下分组开展实验:①Hela/DDP、Hela细胞设置不同浓度(0、5、10、20、40、80 μg/mL)顺铂处理组;②Hela/DDP细胞设置对照组(不处理)、顺铂组(10 μg/mL顺铂)、低浓度槲皮素组(10 μg/mL顺铂+20 μmol/L槲皮素)、中浓度槲皮素组(10 μg/mL顺铂+40 μmol/L槲皮素)和高浓度槲皮素组(10 μg/mL顺铂+80 μmol/L槲皮素);③Hela/DDP细胞设置NC组、NC-siRNA组和miRNA-18a-siRNA组,按组转染处理,均加入终浓度为10 μg/mL的顺铂和80 μmol/L的槲皮素.CCK-8法检测Hela/DDP、Hela细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hela/DDP细胞凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测Hela/DDP细胞中miRNA-18a表达情况;蛋白免疫印迹法检测Hela/DDP细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况.结果 使用5、10、20、40、80 μg/mL浓度的顺铂处理后,Hela/DDP细胞增殖抑制率均低于Hela细胞(P<0.05);顺铂对Hela、Hela/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)分别处于5~10 μg/mL、10~20 μg/mL之间.与对照组相比,顺铂组Hela/DDP细胞增殖率、细胞中Bel-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、细胞中miRNA-18a、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与顺铂组相比,低、中、高浓度槲皮素组Hela/DDP细胞增殖率、细胞中Bel-2蛋白表达水平降低(P<0.05),凋亡率、细胞中miRNA-18a、Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05).与NC-siRNA组相比,miRNA-18a-siRNA组Hela/DDP细胞中miRNA-18a表达水平及细胞凋亡率均显著降低(P<0.05),细胞光密度(OD)值显著升高(P<0.05).结论 槲皮素可在顺铂处理宫颈癌Hela/DDP细胞基础上进一步抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,且可能是通过上调miRNA-18a表达逆转宫颈癌细胞的顺铂耐药性.
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