8-Br-cAMP与顺铂对Eca-109细胞DNA polβ,wtp53基因表达及多药耐受蛋白的影响

Effects of differentiation drug in comparision with genotoxic drug on gene expression of DNA polβ, wtp53 and drug resistance in Eca-109 cells

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摘要目的:比较分化诱导剂8-Br-cAMP与基因毒性药物顺铂对Eca-109细胞DNA polβ及wtp53基因表达和多药耐受蛋白的影响.方法:分别制备生物素和地高辛标记的polβ探针和生物素标记的野生型p53(wtp53) 探针,并检测各探针灵敏度.将培养的人食管癌Eca-109细胞分组如下:①8-Br-cAMP组(Br组);②不加8-Br-cAMP的对照组(C1组),①②组同时培养48 h; ③顺铂组(Pt组);④不加Pt的对照组(C2组),③④组同时培养24 h.应用原位杂交技术显示各组细胞polβ基因的表达.对①②及③组细胞进行polβ及wtp53双信号原位杂交,并应用多药耐受蛋白(MRP)的免疫组化方法检测耐药性.结果:生物素标记的polβ探针的杂交信号呈兰紫色细颗粒,分布于胞质; Br组信号弱于C1组, P<0.05.Pt组的信号比C2组强,P<0.05.Br组的MRP-IR弱于C1组,P<0.05; Pt组的多药耐受蛋白免疫反应性(MRP-IR)强于C2组,P<0.05.地高辛标记的polβ探针的杂交信号呈橙色细颗粒,生物素标记的wtp53探针的杂交信号呈蓝紫色细颗粒,均分布于胞质.在双杂交信号细胞内C1组的橙色强于蓝紫色信号;而Br组的蓝紫色信号较明显,Pt组的橙色信号较C1组更显著,3组相比P皆<0.05.结论:8-Br-cAMP可下调polβ基因表达及耐药性,上调wtp53基因表达,提示Eca-109细胞polβ基因是高表达的,8-Br-cAMP具有使细胞趋向正常分化效应;相反,顺铂上调polβ基因表达及耐药性,下调wtp53基因表达,提示Pt可能导致增变基因表型增加,分化诱导剂比基因毒性药物治疗肿瘤可能具有较好的疗效.