换一批
换一批摘要目的:观察核糖体40 s小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)特异性短发夹RNA(shRNA)对EC9706细胞p70S6K表达的影响.方法:根据GenBank p70S6K的mRNA序列,设计并合成p70S6K特异性的shRNA序列,退火形成双链后插入pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体,构建表达载体pshRNA-p70S6K,转染EC9706细胞.采用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染24、48、72、96及120 h后细胞中p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K的表达,设未转染的EC9706细胞为对照.结果:各组细胞p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K蛋白的表达差异有统计学意义(F=106.343,721.632,P均＜0.001).转染细胞p70S6K mRNA的表达在转染24、48和72 h后均较对照组下降(P＜0.05),在第48 h表达最低;磷酸化p70S6K蛋白的表达在转染24、48、72和96 h后均较对照组下降(P＜0.05),第48 h表达最低.结论:p70S6K特异性shRNA能够下调EC9706细胞中p70S6K mRNA和蛋白的表达.
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分类号
R735.1
DOI
10.3969/j.issn.1671-6825.2011.01.003
发布时间
2011-04-25
基金项目
国家自然科学基金
教育部"十·五"、"211工程"重点学科建设项目
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