发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定

Prokaryotic expression and identification of severe fever with thrombocy-topenia syndrome bunyavirus nucleocapsid protein

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摘要目的：构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（ SFTSV）核蛋白（ NP）基因的原核表达载体，获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法：提取病毒RNA，逆转录为cDNA后 PCR 扩增得到目的片段；通过连接pMD18-T构建克隆载体，测序正确后连接至原核表达载体pMAL-c2x中，转化大肠杆菌JM 109，IPTG诱导表达、纯化MBP-NP融合蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot对融合蛋白进行分析；建立间接ELISA方法对SFTSV患者血清NP抗体进行检测。结果：成功构建了NP基因的原核表达载体pMAL-c2x-NP，通过优化表达条件获得了纯化的带MBP标签的融合蛋白，经免疫印迹杂交证实重组蛋白具有抗原性。用建立的ELISA方法检测96例SFTSV患者血清，阳性率为40．6％；实时荧光定量RT-PCR 方法阳性率为55．2％，两者符合率为77．1％（ Kappa＝0．550， P＜0.001）。结论：成功构建了SFTSV NP基因的原核表达系统，诱导表达了具有抗原性的MBP-NP融合蛋白，为进一步研发SFTSV的ELISA诊断试剂盒奠定了基础。