紧密连接蛋白12对胶质母细胞瘤细胞增殖和上皮间充质转化的影响
Effects of Claudin-12 on proliferation and epithelial-mesenchymal transi-tion of glioblastoma cells
摘要目的:探讨紧密连接蛋白12(CLDN12)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和上皮间充质转化(EMT)过程的影响.方法:利用慢病毒感染技术构建CLDN12低表达的人GBM U87、U251细胞系,采用MTT实验检测阴性对照组和CLDN12低表达组(shCLDN12组)U87、U251细胞活力,利用qRT-PCR、Western blot法检测CLDN12与细胞增殖标志物P16、P21、PCNA mRNA和蛋白的表达,利用细胞免疫荧光实验检测EdU阳性细胞率、E-cadherin荧光强度,利用Western blot检测EMT与PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达.结果:与阴性对照组相比,shCLDN12组U87、U251细胞活力在72、96 h时降低,P16、P21 mRNA和蛋白表达水平升高,PCNA mRNA和蛋白表达水平降低,ZEB1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平降低,KRT19蛋白表达水平升高,PI3K、AKT蛋白磷酸化受到抑制(P<0.05).与阴性对照组相比,shCLDN12组U87、U251细胞中EdU阳性细胞率降低,E-cadherin荧光强度升高(P<0.05).结论:CLDN12可能通过激活PI3K-AKT信号通路促进GBM细胞增殖和EMT过程.
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