芪慈三苓汤调控RNF180抑制膀胱癌细胞株T24/DDP顺铂耐药性的作用机制
Mechanism of Qici Sanling Decoction Regulating RNF180 to Inhibit Cisplatin Resistance in Bladder Cancer Cell Line T24/DDP
摘要目的:探讨芪慈三苓汤(Qici Sanling decoction,QCSL)通过调控环指蛋白180(ring finger protein 180,RNF180)影响膀胱癌细胞株 T24/DDP 顺铂耐药的作用机制.方法:将 T24 细胞分为 T24 组、T24/DDP 组、T24/DDP+QCSL 组,顺铂浓度为0、2.5、5、10 μmol·L-1,采用 CCK-8 法检测0、24、48、72 h 的细胞活性.将 T24/DDP 细胞分为 Control 组、DDP 组、QCSL 组、QCSL+DDP 组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移数量.qPCR 法检测膀胱癌患者癌组织(Cancer组)和癌旁正常组织(Normal 组)中 RNF180 mRNA 表达水平.将 T24/DDP 细胞分为 Control 组、QCSL 低浓度组(0.5 g·mL-1)、QCSL 中浓度组(1g·mL-1)、QCSL 高浓度组(2g·mL-1),Western blot 和 qPCR 法检测 RNF180 蛋白和基因表达水平.将T24/DDP 细胞分为 Control 组、Control+DDP 组、QCSL+DDP 组及 QCSL+DDP+siRNF180 组,采用 Western blot 法检测RNF180 蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移数量.结果:CCK-8 显示,培养48 h、72 h 时随着顺铂浓度增加,各组细胞增殖活性降低(P<0.001),QCSL 能明显改善 T24/DDP 细胞的顺铂耐药性.与Control 组比较,DDP 组细胞凋亡率升高(P<0.001);与 DDP 组、QCSL 组比较,QCSL+DDP 组细胞凋亡率升高(P<0.001).与 Control 组比较,QCSL 组、DDP 组细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.001);与 DDP 组、QCSL 组比较,QCSL+DDP 组细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.001).与 Normal 组比较,Cancer 组患者癌组织中 RNF180 mRNA 水平降低(P<0.01).与 Control 组比较,QCSL 中浓度组、高浓度组细胞 RNF180 蛋白和基因表达水平升高(P<0.05).与 Control+DDP 组比较,QCSL+DDP 组和 QCSL+DDP+siRNF180 组细胞RNF180 蛋白表达水平升高(P<0.001);与QCSL+DDP 组比较,QCSL+DDP+siRNF180 组细胞 RNF180 蛋白表达水平降低(P<0.001).与 Control 组比较,Control+DDP 组细胞凋亡率升高、细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.001);与 Control+DDP 组比较,QCSL+DDP 组和 QCSL+DDP+siRNF180 组细胞凋亡率升高、细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.001);与 QCSL+DDP 组比较,QCSL+DDP+siRNF180 组细胞凋亡率降低、细胞迁移和侵袭数量增加(P<0.001).结论:芪慈三苓汤可能通过上调 RNF180 表达改善 T24/DDP 细胞的顺铂耐药性.
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