里氏木霉QM9414尿嘧啶缺陷型转化体系改进和β-葡萄糖苷酶的过量表达

Improvement of uracil auxotrophic transformation system inTrichoderma reesei QM9414 and overexpression ofβ-glucosidase

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摘要里氏木霉是广泛应用于纤维素酶生产的工业真菌，但高产突变株遗传操作困难，限制了菌种改良。首先利用定点整合策略敲除里氏木霉突变株QM9414的pyr4基因，成功构建尿嘧啶营养缺陷型菌株QP4，其遗传转化效率显著提高，而且产酶能力不受影响。进一步在QP4中过量表达β-葡萄糖苷酶（BGL）基因bgl1，经大量平板显色筛选获得2株BGL活力明显增强的工程菌QPB4和QPB5，其酶活分别提高10.01倍和8.26倍。利用发酵酶液对2种不同预处理的玉米芯底物进行水解糖化实验，结果显示以酸处理玉米芯为底物时QPB4和QPB5的葡萄糖得率比QP4分别提高60.98%和52.44%，而以脱木素处理玉米芯为底物时其葡萄糖得率分别提高80.01%和86.00%。研究表明改进里氏木霉高产突变株遗传转化体系可以显著促进菌株改良，提高糖化应用效果。

作者钟立霞 ^[1] 钱远超 ^[2] 戴美学 ^[3] 钟耀华 ^[2] 学术成果认领

作者单位山东师范大学生命科学学院，山东济南 250014; 山东大学生命科学学院，微生物技术国家重点实验室，山东济南 250100 ^[1] 山东大学生命科学学院，微生物技术国家重点实验室，山东济南 250100 ^[2] 山东师范大学生命科学学院,山东济南,250014 ^[3]

关键词纤维素酶里氏木霉高产突变株遗传转化水解糖化尿嘧啶营养缺陷型标记构建和表达生物技术生物工程 cellulases Trichoderma reeseihigh-production mutant genetic transformation saccharification uracil auxotroph construction and expression biotechnology biological engineering

分类号 TQ812

栏目名称 生物化学工程与技术

DOI 10.11949/j.issn.0438-1157.20151654

发布时间 2016-06-29

基金项目

国家自然科学基金面上项目(31370135) 山东省农业科技成果转化资金项目(2014No.45) 山东大学基本科研业务费专项资金项目(2015CJ005)。@@@@supported by the National Natural Science Foundation of China the Agricultural Science and Technology Achievement Transformation Fund of Shandong Province the Fundamental Research Funds of Shandong University