换一批
换一批摘要对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达，为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板，PCR扩增Flic基因，产物与T载体连接，经测序鉴定正确后与表达载体pQE30（＋）连接构建重组表达质粒Flic—pQE30，将此重组质粒转化人表达宿主E．coliXLI—Blue菌株内抽提质粒，酶切鉴定正确后对转化菌株以1PTG进行诱导后，表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后，进行SDS—PAGE和Westernblot分析。测序结果显示，FliC为完整的编码区基因1485bp，编码495个氨基酸残基，蛋白相对分子质量约为56kDa。经SDS—PAGE分析表明，以37℃、1mM的IPTG诱导5h，表达效果最好，诱导产物是与理论值相符的56kDa的融合蛋白。经western—blotting检测，表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带，表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白nic基因的克隆表达，为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。
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