东北红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA克隆及其与紫杉醇产生菌基因组DNA的Southern杂交

Cloning of taxadiene synthase cDNA from Taxus cuspidata and its southern hybridization with the genome DNA of taxol-producing fungus

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摘要为进一步研究紫杉二烯合成酶的作用机理和紫杉醇生物合成代谢调控机制,采用RT-PCR技术从东北红豆杉(Taxus cuspidata)树叶中获得了紫杉二烯合成酶基因片段,将该片段克隆在载体pGEM Teasy vector上,并转化到E.coli JM109中,经EcoR Ⅰ酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,获得紫杉二烯合成酶基因片段长度为909 bp,编码303个氨基酸,与GenBank中收录的紫杉二烯合成酶的同源性达到98%;对获得的紫杉二烯合成酶基因和紫杉醇产生茵HQD33基因组DNA进行了Southern杂交.结果初步证实了紫杉二烯合成酶存在于通过内生真菌发酵生产紫杉醇的生物合成途径中.为利用分子生物学手段研究通过内生真菌发酵生产紫杉醇生物合成的代谢调控和构建高产紫杉醇基因工程菌株提供了强有力的理论指导.

作者赵凯 ^[1] 王歆 ^[1] 李秀凉 ^[1] 张新建 ^[1] 肖珊 ^[1] 平文祥 ^[1] 周东坡 ^[1] 学术成果认领

作者单位黑龙江大学生命科学学院,微生物黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨,150080 ^[1]

关键词东北红豆杉内生真茵紫杉醇紫杉二烯合成酶 Southern杂交 Taxus cuspidata taxol-producing fungi taxadiene synthase southern hybridization biosynthesis pathway

分类号 O189.1

DOI 10.3969/j.issn.1001-7011.2010.06.012

发布时间 2011-04-07

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